知识点微生物学检验病原性球菌及检

一、葡萄球菌属   一群革兰阳性球菌,因常堆聚成葡萄串状而得名。 (一)生物学特性

  1.形态与结构   G+,球形,0.5~1.5μm,呈葡萄串状成堆排列(在脓汁、肉浸液培养物中,可见单个,成对或短链排列),无鞭毛和芽胞,某些菌株能形成荚膜。   2.培养特性   需氧或兼性厌氧,营养要求不高,最适pH为7.4,最适温度为35~37℃。   普皿:圆形、凸起、表面光滑湿润、边缘整齐并且不透明的菌落,直径为2~3mm。可产生不同的脂溶性色素,如金黄色、白色、柠檬色色素。   血琼脂平板:几乎所有的葡萄球菌可产生α、β、γ和δ溶血素。   液体培养基:生长迅速呈均匀混浊状。   3.生化反应   触酶试验(+);多数能分解葡萄糖、麦芽糖及蔗糖,产酸不产气;分解甘露醇产酸、液化明胶和产生血浆凝固酶(多数致病性葡萄球菌)。   4.抗原   (1)蛋白抗原:为完全抗原,有种属特异性,无特异性。存在于葡萄球菌的表面,结合在细胞壁的粘肽部分,具有抗吞噬作用,称葡萄球菌A蛋白(SPA)。   (2)多糖抗原:是半抗原,具有特异性,有三种:①A型多糖抗原;②B型多糖抗原;③C型多糖抗原。   5.分类   (1)《伯杰系统细菌学手册》   (2)古典分类法   6.抵抗力   对理化因素抵抗力强,耐热,耐干燥,耐高盐。   是抵抗力最强的无芽胞细菌。   

(二)临床意义   葡萄球菌感染的特点是感染部位组织的化脓、坏死和脓肿形成。   金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌和腐生葡萄球菌是引起临床感染最常见的葡萄球菌。   (1)金黄色葡萄球菌   致病物质:   血浆凝固酶;葡萄球菌溶血素;杀白细胞素;肠毒素;表皮溶解毒素;毒性休克综合征毒素。      (2)表皮葡萄球菌   存在于皮肤的正常栖居菌,为医院感染的重要病原菌,它是导致血培养污染的常见细菌之一。   (3)腐生葡萄球菌   导致尿路感染的常见病原菌之一。(三)微生物学检查      标本采集(不同疾病采集不同标本):   脓汁、渗出液、伤口分泌物、血液、尿液、粪便、痰液以及脊髓液等。      报告:检出“XXX葡萄球菌”   耐药性检测   检测耐甲氧西林的金葡菌(MRSA),耐甲氧西林的表葡菌(MRSE),耐万古霉素的金黄色葡萄球菌(VRSA),耐万古霉素的表皮葡萄球菌(VRSE)。(四)治疗原则   由于耐药菌株日益增多,治疗葡萄球菌感染时,应根据体外药敏试验选择抗生素。如果是危、急、重症感染,应首先根据经验选药,如万古霉素等,待体外敏感试验结果回报后,再调整用药,针对治疗。二、链球菌属   (一)生物学特性   1.形态与染色   G+,圆形,0.8~1.0μm,呈链状排列(在液体培养基中易成长链。在脓汁标本中为短链,成双或单个散在)。   无鞭毛、无芽胞,某些菌株在血清肉汤中可有荚膜。   2.培养特性   大多为需氧或兼性厌氧菌,少数微需氧及专性厌氧。营养要求较高。最适温度为35~37℃,最适pH为7.4~7.6,在5%CO2环境下生长更好。   液体培养基:溶血性菌株呈絮状或颗粒状沉淀生长。上层液体澄清,可有菌膜。不溶血菌株则均匀浑浊生长。   血琼脂平板:灰白色、圆形、凸起、细小菌落,不同溶血环。   3.生化反应   触酶试验(-),能分解葡萄糖产酸不产气,对其他糖类的分解因不同菌株而异。   4.分类   (1)根据溶血能力分类:   甲型(α)溶血性链球菌:本菌为条件致病菌。   

乙型(β)溶血性链球菌:该型细菌致病性最强,常引起人和动物多种疾病。   

丙型(γ)链球菌:一般无致病性。   (2)根据链球菌细胞壁抗原(即C抗原)分类,即常用Lancefield血清分型法:   将链球菌分为A、B、C、D……T等18个群(其中I和J缺),对人类有致病性的90%属A群,B、C、D、G群链球菌感染较少见。   5.对理化因素的抵抗力   不强,对各种常用消毒剂敏感,60℃加热30分钟即可杀灭。   (二)临床意义   A群溶血性链球菌

致病物质

所致疾病

链球菌溶血素

急性化脓性感染(丹毒、痈、蜂窝组织炎、咽炎、鼻窦炎、中耳炎、脑膜炎、产褥热)

透明质酸酶

链激酶,链道酶

致热外毒素

猩红热

M蛋白

变态反应性疾病(风湿热,肾小球肾炎)

  草绿色链球菌:属条件致病菌,常与亚急性心内膜炎相关。   B群链球菌:是新生儿肺炎、脑膜炎和败血症的病原体。   D群链球菌:引起呼吸道和泌尿道感染。   治疗原则:   A群链球菌感染,青霉素G被列为首选。   B群链球菌常常采用青霉素G和一种氨基糖苷类合用。   (三)微生物学检查   标本采集(不同疾病采集不同标本):   可采集脓汁、咽拭、痰、血、尿等标本。

三、肺炎链球菌   (一)生物学特性   1.形态与染色   G+,球菌,呈矛尖状、钝面成双排列,有时呈短链状,0.5~1.25μm,有荚膜(在人或动物体内易形成),无鞭毛,无芽胞。   2.培养特性   需氧或兼性厌氧;最适的温度为35~37℃;最适的pH7.6~8.0;营养要求较高。   血琼脂平板:形成灰色扁平、中心凹陷(因菌落发酵所致)直径为0.5~1.0mm的菌落,周围有草绿色溶血圈。   液体培养基:均匀混浊。但培养时间过长,可因产生自溶,培养液可变澄清,管底沉淀。   3.生化反应   多数菌株分解菊糖、胆汁溶解试验阳性、Optochin敏感试验阳性。(肺炎链球菌与草绿色链球菌的鉴别)。   (二)临床意义   致病物质:荚膜。   所致疾病:大叶性肺炎、支气管炎。可继发胸膜炎、脓胸,也可   引起中耳炎、鼻窦炎、脑膜炎及败血症。   (三)微生物学检查   1.标本采集   2.试验方法及鉴定   (1)直接涂片检查:经革兰染色,镜检见革兰阳性矛尖状双球菌。   (2)分离培养:   血液、脑脊液需增菌培养,呈均匀混浊,而且有绿色荧光。脓汁或脑脊液沉渣接种血琼脂,置5%~10%C02环境中培养。   (3)鉴定试验   1)胆汁溶解试验(+)   2)菊糖发酵试验(+)   3)0ptochin敏感试验(+)   4)荚膜肿胀试验(+)   5)动物试验:小白鼠对肺炎链球菌极为敏感。   6)快速乳胶凝集试验(+)   四、肠球菌属   肠球菌属是肠道的正常栖居菌。   (一)生物学形状   1.形态和结构   G+,成双或短链状排列的卵圆形球菌,无芽胞,无荚膜,部分肠球菌有稀疏鞭毛。   2.培养特性   营养要求高,需氧及兼性厌氧。在胆汁七叶苷和含6.5%NaCl培养基中可以生长(此点可与链球菌鉴别)。   血平板上主要表现为γ-和α-溶血。   3.生化反应   触酶(-),多数肠球菌能水解吡咯烷酮-β-萘基酰胺(PYR)。   与同科链球菌的显著区别:   能在高盐(6.5%NaCl)、高碱(pH9.6)、40%胆汁培养基上和10℃~45℃环境下生长;   对许多抗菌药物表现为固有耐药(如复方增效磺胺、头孢菌素、克林霉素和低浓度的氨基糖苷类)。   (二)临床意义   肠球菌是G+菌中仅次于医院感染病原菌。   最常见的为尿路感染,其次为腹部和盆腔等部位的创伤和外科术后感染。   临床上分离率最高的是粪肠球菌,其次是屎肠球菌。   肠球菌致病基因:主要有细胞溶解素激活基因、明胶酶基因、表面蛋白基因、胶原蛋白黏附素基因、聚集物质基因和粪肠球菌心内膜炎基因等。   (三)微生物学检验   采集标本:如尿液、脓汁、胆汁、分泌物或血液等。   方法:以直接涂片进行初步检查。分离培养后,挑取可疑菌落,进行涂片、染色、镜检、触酶试验、胆汁七叶苷试验和6.5%NaCl耐受试验,可鉴定到属。   耐药性检测:一般要测试对β-内酰胺类尤其是青霉素类(如青霉素、氨苄西林)、万古霉素和氨基糖苷类(如庆大霉素)的敏感性。同时也应对β-内酰胺酶进行测试。   (四)结果评价   药敏结果中必须注明β-内酰胺类(如青霉素G、氨苄西林)的敏感性。庆大霉素的耐药水平(是否为高水平耐药)万古霉素的敏感性以及β-内酰胺酶测试结果。   (五)治疗原则   一般采用β-内酰胺类和氨基糖苷类联合治疗,氧氟沙星与氨苄西林有协同作用。必要时还要改用万古霉素或替考拉宁。五、奈瑟菌属   G-,双球菌,无鞭毛,无芽胞,有菌毛。   专性需氧,氧化酶阳性。   本属主要有9个种。其中对人致病的是脑膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌。   脑膜炎奈瑟菌   简称脑膜炎球菌,是引起流行性脑脊髓膜炎(简称流脑)的病原体。   1.生物学特性   (1)形态与染色:   G-,菌体呈肾形,坦面相对,成对排列,0.6~1.5μm,在患者的脑脊液中位于中性粒细胞内。   (2)培养特性:   营养要求高,属苛养菌。最适温度为35~37℃,最适pH为7.4~7.6。   (3)生化反应:   绝大多数菌株能分解葡萄糖和麦芽糖,产酸不产气(因淋病奈瑟菌不分解麦芽糖,借此与之鉴别);   不分解乳糖、甘露醇、半乳糖和果糖,硝酸盐还原试验阴性不分解尿素、不产生H2S和靛基质;触酶试验阳性,氧化酶试验阳性。   

(4)抗原及分型:   主要有四种抗原:荚膜多糖群特异性抗原、外膜蛋白型特异性抗原、脂多糖抗原及核蛋白抗原。   根据群特异性荚膜多糖抗原不同,将本菌分为A、B、C、D、X、Y、Z、、29E和W等。   目前,对人致病的主要是A群,偶见B群、C群及群引起散发病例。   2.临床意义   致病物质:菌毛,荚膜,内毒素。   所致疾病:脑膜炎奈瑟菌是流行性脑脊髓膜炎的病原菌。主要表现发热,皮肤瘀斑,脑膜刺激症状。存在于携带者或病人的鼻咽部,借飞沫经空气传播,冬末春初为流行高峰。   3.微生物学检验   (1)标本采集:血液;瘀斑渗出液;脑脊液;鼻咽分泌物。   注:因本菌能产生自溶酶,易自溶,故采集的标本不宜置冰箱,应立即送检。   (2)检验方法及鉴定:   1)直接涂片检查:取脑脊液离心后沉淀物涂片或刺破瘀斑血印片,干燥固定后革兰染色。若发现中性粒细胞内(或胞外)革兰阴性双球菌,呈肾形成对排列,可初报。   2)分离培养:将标本增菌培养液直接接种于血琼脂平板、巧克力琼脂或EPV琼脂,置5%~10%C02环境中,35℃培养18~24h后可见圆形、灰褐色、湿润、光滑、边缘整齐、直径1~2mm的小菌落。   3)鉴定:   ①细菌染色形态:G-,菌体呈肾形,坦面相对,成对排列。   ②氧化酶试验(+)   ③触酶试验(+)   ④分解葡萄糖、麦芽糖产酸不产气   ⑤荚膜多糖抗原直接凝集试验   4.治疗原则:   青霉素G为首选,三代头孢对脑膜炎奈瑟菌也具有很强的抗菌活性。青霉素过敏的病人可考虑选用三代头孢或氯霉素。   淋病奈瑟菌   简称淋球菌,是淋病的病原体,人类是其唯一的天然宿主和传染源。   1.生物学特性   (1)形态与染色:   G-,球形或肾形,成对排列,0.6~0.8μm。在脓汁标本中,通常位于中性粒细胞内,而在慢性淋病时常位于细胞外。从患者体内新分离的菌株可有荚膜和菌毛,无芽胞和鞭毛。   (2)培养特性:   营养要求较高,国内常用血液琼脂、巧克力琼脂、EPV琼脂等培养基。最适pH为7.5,最适温度为35~37℃。初次分离时,须置5%~10%CO2条件下才能生长发育。   菌落:表面光滑、凸起、半透明、高亮度、直径0.5~1.0mm的圆形菌落。   (3)生化反应:   对糖类生化活性最低,本菌可发酵葡萄糖、产酸,但不酵解麦芽糖(常借此与脑膜炎奈瑟菌相鉴别)。   氧化酶和触酶试验均阳性。   (4)主要抗原:   菌毛蛋白抗原、脂多糖抗原和外膜蛋白抗原。   (5)抵抗力:对外界抵抗力极低。   2.临床意义:   淋病奈瑟菌是常见的性传播疾病淋病的病原菌,主要通过性接触直接侵袭感染泌尿生殖道,口咽部及肛门直肠的黏膜。如单纯性淋病、盆腔炎、淋菌型结膜炎。   3.微生物检验   (1)标本采集:脓性分泌物,尿道拭子,宫颈口分泌物,眼结膜分泌物,血液。   (2)检验方法及鉴定   1)直接涂片检查:收集标本后立即涂片、革兰染色,镜检时见中性粒细胞内数对革兰阴性双球菌,可初诊。   2)分离培养:细菌培养仍是目前世界卫生组织推荐的筛选淋病患者的唯一方法。   及时接种含有两种以上抗生素(万古霉素和多黏菌素等)的营养培养基上。   3)鉴定:   ①生化反应:氧化酶阳性,仅分解葡萄糖产酸;不发酵麦芽糖与蔗糖,30%H2O2试验阳性可与脑膜炎奈瑟菌等相鉴别。   ②免疫学方法:荧光抗体染色法、协同凝集试验。   ③核酸探针杂交法。   4.治疗原则   对青霉素和四环素耐药的淋病奈瑟菌越来越多,目前一线用药一般为三代头孢菌素,氟喹诺酮类、大观霉素可作为替代药物。对氟喹诺酮类、大观霉素的耐药也有报道。六、卡他布兰汉菌   G-,双球菌,约0.6~1.0μm,无芽胞,无鞭毛。   营养要求不高,在普通培养基上18~20℃即可生长,借此可与脑膜炎奈瑟菌鉴别。需氧,菌落光滑,直径约1~3mm,不透明,灰白色,菌落易从培养基上刮下。   氧化酶和触酶阳性,产DNA酶,大部分菌株还原硝酸盐和亚硝酸盐,借此可与奈瑟菌属相鉴别。   可致中耳炎、鼻窦炎、肺炎。   

朱世良

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