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第七部分

微生物学和微生物检验

特点：独立生活的单细胞和细胞群体形式存在

原核细胞型：裸露DNA分子、无核膜核仁、细胞器不完整、只有核糖体、无有丝分裂、仅有原始核、以二分裂繁殖

真核细胞型：细胞器完整、有丝分裂

非细胞型：通过细菌滤器、无产生能量酶系统、只在活细胞内繁殖（病毒、亚病毒、朊粒）

显微镜发明~列文虎克

传染因子的确立：巴斯德~巴氏消毒法、李斯特~无菌外科手术、郭霍~创立固体培养基（发现炭疽杆菌、结核分枝、霍乱弧菌）提出郭霍原则

病毒发现：伊凡诺夫斯基~烟草花叶病毒

抗生素的发现：费莱明~青霉素、弗洛里~提纯青霉素用于治疗

免疫学兴起：琴纳~牛痘预防天花、巴斯德（鸡霍乱、炭疽、狂犬疫苗）

细菌的形态与结构

细菌~具有细胞壁和细胞核质、无核膜核仁、除核糖体外无其他细胞器的单细胞原核细胞型微生物（微米为单位um）

分为：球菌、杆菌、螺形菌

双球菌（脑膜炎奈瑟菌、肺炎链球菌、淋病奈瑟菌）

链球菌（溶血性链球菌）

葡萄球菌（金黄色）

四联球菌、八叠球菌

杆菌分散（大肠埃希菌）

链状（炭疽芽胞杆菌）

分支状（结核分枝杆菌）

八字栅栏状（白喉棒状杆菌）

螺形菌

弧菌（霍乱弧菌）

螺菌（鼠咬热、钩端螺旋体）

细菌的结构

细胞壁：差异分为G+菌、G—菌

功能：保护、内外物质交换、抗原决定簇（决定抗原性）、鞭毛运动支点、屏障作用、参与细胞分裂

肽聚糖为G+与G—菌细胞壁共有成分又称黏肽（多肽）

抗生素抑菌作用于肽聚糖合成的某阶段所致（青霉素抑制五联桥的连接）

磷壁酸为G+菌细胞壁特有成分、表面抗原

外膜层为G—菌特有成分，由脂多糖、脂质双层（磷脂）、脂蛋白构成

细胞膜：半渗透性生物膜、平行排列的脂质双层、细胞膜内陷折叠呈管状形成中介体

细胞质：由细胞膜包裹的无色透明溶胶性物质

特点：胞质内的核糖核酸决定了菌体的嗜碱性

超微结构：核蛋白体（RNA、蛋白质）是蛋白合成场所

核质（拟核）闭环双链DNA反复盘绕、主要遗传物质

质粒（染色体以外的遗传物质）

细胞颗粒（异染颗粒~嗜碱性强）鉴定细菌依据

细菌特殊结构

荚膜~（多糖为主、少为多肽）碱性染料不易着色

鞭毛~抗原性（特殊鞭毛具有H抗原）

菌毛~普通菌毛是粘附器官、有性菌毛的为雄性菌（F*菌具有致育性）以接合方式

芽孢~细菌（G+杆菌为主）、为休眠状态

细菌L型：细胞壁缺陷~G+菌L型细菌为原生质体（高渗环境存活）

G—菌L型细菌为原生质球（低渗环境有抵抗）

分：油煎蛋样菌落（典型L型）、颗粒型（G型菌落）、丝状（F型菌落）

细菌的生理

细菌含有核糖核酸（RNA）与脱氧核糖核酸酶（DNA）两种，RNA存在于胞质中，DNA存在于染色体和质粒中（每种细菌的G+C含量摩尔百分百可作为细菌分类依据）

物理性状

带电现象~G+菌等电点PL为2~3、G—菌等电点PL为4~5(带电现象与细菌的染色反应、血清凝集反应、抑菌杀菌作用密切)

异营菌~不能以无机碳化合物作为唯一碳源、利用有机物来合成（腐生菌、寄生菌）

所有致病菌都是异营菌

营养物质：水、碳源、氮源、无机盐类、生长因子

PH~正常多数为PH7.2~7.6、霍乱弧菌PH8.4~9.2、

结合分枝杆菌PH6.5~6.8、乳酸杆菌PH5.5

温度~嗜冷（0~20℃）、嗜热（50~60℃）、嗜温（30~37℃）

气体~微需氧菌（5%左右低氧环境中生长最好、＞10%对其抑制）

细菌以二分裂方式进行无性繁殖（结核分支进行分支方式繁殖）、20~30分钟分裂一次为一代、而结核要18~20小时分裂一次

细菌数测定：比浊法~与麦氏标准管比浊（0.5号标准规内含细菌浓度为11.5亿/ML）

测活菌数~琼脂平板经37℃、18小时培养后计算菌落数推算细菌数

细菌的生长曲线

以生长时间为很坐标、菌数的对数为纵坐标：迟缓期（适用新环境一般1~4小时）

对数期（研究细菌性状最佳时期）

稳定期（外毒素、抗生素多此时形成）

细菌的新陈代谢

不同的酶的代谢产物及生化反应都不同

胞内酶：氧化还原酶

胞外酶：一些水解酶

代谢能量来源：以生物氧化作用获得（以脱氢、失电子为主要方式）

以分子氧或无机物为受氢体的生物过程~呼吸（以分子氧为有氧呼吸、以其他无机物为受氢体为厌氧呼吸）

以有机物为受氢体的生物过程~发酵

病原菌获得能量的机制主要是~醣类

细菌的分解代谢

对醣类的分解代谢：分泌胞外酶将菌体外多糖分解为单糖（葡萄糖）进而转化丙酮酸，

需氧菌将其经三羧酸循环彻底分解CO2和水、厌氧菌发酵丙酮酸。

对蛋白质分接代谢：分泌的胞外酶（蛋白水解酶）作用分解为短肽、再由胞内酶分解为氨基酸，有脱氢、脱羧两种方式（色氨酸脱氨基生成吲哚、氨基酸脱羧生成组胺）

细菌代谢及产物的意义

热原质~多为G—菌合成的菌体细胞壁成分的脂多糖

毒素和侵袭性酶~内毒素为G—细胞壁的脂多糖

外毒素有多数G+和少量G—细菌产生、毒性强于内毒素

侵袭性酶（卵磷脂酶、透明质酸酶等）

色素~水溶性色素（铜绿假单胞）、脂溶性色素（金葡菌）

抗生素~多由放线菌、真菌产生

细菌素~某些细菌产生具有抗菌作用的蛋白质（大肠菌素、绿脓菌素、变形菌素等）

细菌的分布

芽孢细菌（炭疽芽孢杆菌、破伤风梭菌、气性坏疽）可长期存活土壤

厌氧芽孢杆菌~创伤感染病原菌主要来源

大肠埃希菌为水被粪便污染主要指标（1ml水细菌数不超过个、1L埃希菌群数《3个）

空气污染的指标~测定1立方米空气中的细菌总数与链球菌数

引起菌群失调的诱因：球菌（金葡菌、粪肠球菌）

杆菌（以G—杆菌为主：大肠埃希菌、铜绿假单胞、变形、产气、流感嗜血杆菌、阴沟肠杆菌等）

厌氧菌（类杆菌、产气荚膜梭菌、艰难梭菌）

真菌（白色念珠菌、曲霉菌、毛霉菌等）

外界因素对细菌影响

有芽孢的破伤风梭菌需煮沸3小时才被杀死

湿热：巴氏消毒~牛乳消毒（61~62℃30分钟、71.7℃15~30分钟）

煮沸法~℃5分钟可杀死细菌繁殖体、加入2%碳酸钠提高沸点至℃即杀芽孢又防止金属器皿生锈

间歇灭菌法~可杀死芽孢又使不耐高温物质免受影响

加压蒸汽灭菌~KP下达到℃维持15~20分钟可杀灭所有芽孢和繁殖体

干烤：~℃2小时

低温：冷冻真空干燥法

紫外线波长~nm对杀菌最强、可使DNA分子形成胸腺嘧啶双聚体（干扰DNA正常复制导致细菌死亡）、15W紫外线等在1M内传递38uW（无芽孢致死为~uW）

滤过除菌~不耐高温物品灭菌常用薄膜滤器（孔径0.22um）、K型最大澄清用、EK-S最小可阻止大病毒通过

干燥~芽孢抵抗力最大（肺炎链球菌、脑膜炎奈瑟菌抵抗小）

表面活性剂~新洁尔灭、消毒净、度米芬等

细菌的异常与变异

微生物的遗传物质是DNA、病毒的是DNA或RNA携带、细菌的遗传物质存在于（染色体、质粒、转位因子中。）

染色体~环状双螺旋长链、反复折叠扭曲形成负超螺旋结构（无内含子、直接产生mRNA）

细菌质粒~染色体外的环状双股DNA、不依赖染色体的自主复制

分为：耐药质粒（R质粒）、Col质粒（编码大肠埃希菌）、Vi质粒（细菌致病性有关蛋白质）

变异现象

形态结构变异：H-O变异（有鞭毛沙门菌失去鞭毛、其抗原性消失）、L型变异（缺细胞壁）

毒力变异：卡介苗（BCG）毒力减弱而保留抗原性的变异株

微生物变异机制

非遗传型变异在细菌中常见包括：突变、基因的转移与重组

游离的DNA片段整合重组以噬菌体为媒介转移到受体菌，噬菌体DNA与细菌染色体重组

~供菌体通过性菌毛将遗传物质转移到受体菌的过程(见革兰阴性菌)

基因重组：同属不同种病毒感染同一细胞，其基因组可相互作用发生重组（交叉复活用于流感病毒疫苗株的制备）

遗传变异研究意义：避免误诊和漏诊的发生、选择敏感药物、防治耐药菌株扩散和提高药物疗效

细菌疫苗的意义：通过基因转移、重组或突变获得的病原微生物减毒活疫苗是理想的预防接种制剂

微生物的致病性与感染

致病能力强弱的程度称毒力（侵袭性、毒素）

抗细菌免疫：抗胞外菌免疫~中性粒细胞的调理吞噬、抗体与补体的溶菌作用

（见于葡萄球菌、链球菌、奈瑟菌、许多G—杆菌等）

抗胞内菌免疫~依靠细胞免疫（结核分枝杆菌、麻风分枝、布鲁菌、沙门菌等）

抗毒素免疫（外毒素）~以抗体为主（白喉、破伤风、气性坏疽等以外毒素指标）

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细菌的致病物质及作用

表面成分：粘附素为细菌表面蛋白质

侵入：病毒的侵袭素与宿主细胞上的整合素结合~侵入宿主细胞

菌体的表面结构：荚膜~抵抗吞噬与补体杀菌作用

菌毛~多种G—菌具有菌毛

侵袭性酶~与致病性有关的胞外酶：血浆凝固酶

透明质酸酶（扩散因子）

链激酶（链球菌溶纤维蛋白酶）

胶原酶（蛋白水解酶）

脱氧核糖核酸酶

外毒素：

主要由G+菌和少数G—菌产生、毒性强、多数为多肽、化学性质为蛋白质（不耐热）、易被酸和消化酶灭活，在0.3~0.4%甲醛作用下脱毒保留其免疫原性~类毒素（刺激机体中和外毒素的为抗毒素）

内毒素：

为许多G—菌的细胞壁结构成分（脂多糖），当细菌死亡、破裂才释放出来（脂质A、非特异核心多糖和菌体多糖3部分组成）。脂质A是内毒素的主要毒性成分。性质稳定、耐热，抗原性弱~不能制成类毒素

生物学活性：制热作用、白细胞增多、感染性休克、DIC（弥散性血管内凝血）。

链球菌溶血素S使血平板出现溶血环

葡萄球菌、链球菌产生杀白细胞素

隐性感染：仅引起机体发生特异性免疫应答、不出现或不明显的临床症状（只能免疫学检查）

显性感染：即感染性疾病

全身感染分为：菌血症~侵入血流、不在血液繁殖

败血症~不断侵入血流、在血中大量繁殖引起全身中毒症状

毒血症~在局部组织生长繁殖、不侵入血流、产生毒素进入血流

脓毒血症~化脓性细菌引起败血症时、通过血流扩散到其他脏器或组织引起心的化脓性病灶

病原携带状态：潜伏期携带（显性感临床症状出现之前）

健康携带者（隐性感染之后）~危害性最大

恢复期携带（显性感染之后）

机体抗菌免疫：机体首先产生非特异性免疫，7~10天才产生特异性免疫

外毒素致病菌感染免疫~依靠特异性抗毒素（IgG类）对毒素的中和作用

细胞外细菌感染的免疫~以中性粒细胞的吞噬和抗体、补体的调理溶菌为主

细胞内细菌感染的免疫~细胞免疫为主

病毒感染和免疫

免疫病理损伤：出现自身抗原导致自身免疫病、免疫复合物沉积于毛细血管基底膜或关节滑膜造成免疫损伤、病毒感染抑制宿主免疫功能

抗病毒免疫：非特异性免疫~巨噬细胞、NK细胞与干扰素均有保护作用

特异性免疫~包含体液与细胞免疫（以细胞免疫为主、体液免疫作用于存在的毒素~IgG与IgM在血流中直接中和毒素）

非传染性感染~是指由外环境获得病原体

感染得到临床征象

潜伏期~观察留检接触者时间的最重要依据

前驱期~起病急骤者无可无前驱期

症状明显期

恢复期~产生免疫、抗体效价逐渐上升

感染性疾病可疑症状主要是~发热

弛张热：一日内体温相差1℃以上(化脓性疾患、败血症、亚急性心内膜炎）

稽留热：体温持续38℃以上、日差1℃以内（肠伤寒、细菌性肺炎）

间歇热：保持发热与正常体温交替（回归热、布鲁菌病、鼠咬热）

微热：持续37.5℃上下（慢性感染、肺结核）

马蹄热：发热数日再退热一日、又复发（登革热）

腹泻与腹痛

菌痢：便意达十数次、排便少、典型者里急后重感、排粘液血便

重症霍乱：量大、粪便无色或淘米水样、腥臭味

病毒性腹泻：多为婴幼儿、粪便多薄白或淡黄色淘米水

肠伤寒：血便或柏油样便

阿米巴痢疾：黏液脓血便或巧克力样卤汁便

毒血症状~引起除发热意外的多种症状：全身不适、厌食、乏力、头痛、肌肉和关节疼痛等，严重者可有神经系统症状、呼吸循环衰竭和肾功能改变；单核-吞噬细胞系统增生、出现肝脾淋巴结肿大等

微生物感染防治

人工主动防御：接种减毒活疫苗、类毒素~预防

人工被动：含特异性抗体的免疫球蛋白或免疫血清~治疗某些外毒素引起的疾病

抗感染治疗原则：安全、有效、经济

细菌的分类

原核生物~无核膜核仁、只有拟核、无线粒体、细胞器不完整、细胞壁成分为肽聚糖、二分裂

真核生物~有核膜核仁和染色体、完整细胞器和线粒体、细胞壁无肽聚糖、分裂为有丝分裂、芽生

病毒~无产生能量的酶系统

科、亚科、属、种

标准菌种可作为质量控制的标准分类系统：伯杰分类系统

目前以细菌的细胞壁结构特点作为最高一级分类依据

细胞形态、格兰染色、鞭毛以及代谢特点为较高一级分类依据

直接镜检2小时内报告结果，分离鉴定与药敏结果于24小时或次日凌晨报告

血清学诊断

已知抗原检测病人血清中的抗体、一般在病程早期或恢复期分别采血检查、抗体效价呈4倍或4倍以上增长有意义（除非检测IgM，否则单份血清一般意义不大）

鳌实验

内毒素在碱性金属离子存在条件下激活考试及中的凝固酶原转变为凝固酶

其阳性表明有G—菌或内毒素血症~本实验是检测内毒素最敏感、快速指标

基因诊断可用于流行病学的大量现场筛查工作

细菌形态学检查

显微镜：普通光学显微镜~波长0.5um在油镜下放大0倍

暗视野~不染色的活细菌、螺旋体的形态及运动观察

相差~不染色活细菌的形态、某些内部结构

荧光~以紫外光或蓝紫光为光源

电子~分辨1nm的物体、在真空干燥下检查、不能观察活的微生物

细菌染色标本检查

碱性染料：显色离子带正电荷、易与带负电荷细菌结合（碱性复红、结晶紫、亚甲蓝）

酸性染料：负电荷、一般细菌带负点故不易着色。通常染细胞胞质（伊红、刚果红）

复合染料：瑞士染料（伊红亚甲蓝）、吉姆萨染料（伊红天青）

复染色法：革兰染色法、抗酸染色法常用

除了粪便、血液等极少数标本外，绝大多数分离培养前都要格兰染色镜检

结晶紫初染~碘液染色~95%乙醇脱色~稀释石碳酸（苯酚）复红染色（阳紫、阴红）

抗酸染色：只用于结核病、麻风病等细菌检查

将有肺结核症状痰标本涂片后妻-纳染色镜检~可见红色抗酸杆菌

荧光染色：结核分枝杆菌、麻风分枝、白喉棒状杆菌及痢疾志贺菌等检测

特殊染色：

异染颗粒、G+棒状杆菌科初步报告形似白喉棒状杆菌

荚膜染色：3%沙黄水染液~~荚膜黄色、菌体赤褐色

芽孢染色：孔雀绿水溶液、0.5%沙黄水溶液复染~~芽孢绿水、菌体红色

鞭毛染色：在非发酵菌的鉴定中有意义

营养物质：蛋白胨（氮源、多种氨基酸、为两性电解质缓冲）

肉浸液（氮源与碳源）氮物质过少时应加入1~2%蛋白胨与0.5%氯化钠

牛肉膏（营养价值低于肉浸液，可用肠道杆菌鉴别培养基）

醣类、醇类（碳源、能源）蔗糖为碳源与能源，其他糖和醇类做发酵反应

血液（提供辅酶、血红素等生长因子）

无机盐（常用氯化钠、磷酸盐）前者维持酶的活性、调节菌体内外渗透压，后者是细菌良好磷源，并有缓冲作用

凝固物质：常用琼脂（石花菜中提取的半乳糖胶）98℃以上溶于水，45℃以下凝固、不被细菌分解、无营养作用

抑制剂：胆盐、煌绿、亚硫酸钠、亚硒酸钠及一些抗生素

指示剂：观察细菌是否利用和分解培养基中的糖、醇类

（常用酚红、甲基红、中性红、溴甲酚紫、溴麝香草酚兰和中国蓝等酸碱指示剂）

亚甲蓝~常作为氧化还原指示剂

培养基种类

基础培养基：溶解液（肉汤）~细菌的增菌、检验、制备其他培养基基础成分

营养培养基：常用血琼脂平板、巧克力血平板

鉴别培养基：测定细菌的生化反应

选择培养基：加入抑制剂来抑制杂菌生长（培养肠道致病菌的SS琼脂）

特殊培养基：厌氧培养基（专性厌氧菌培养基）、（细菌L型培养基）细胞壁缺损

培养基选择：

血平板~适合各类细菌生长、一般标本分离都接种

巧克力血平板~含有5和10因子（嗜血杆菌、奈瑟菌等）

中国蓝/依红亚甲蓝~抑制G+细菌、促进G—细菌生长，为较弱选择性培养基

（鉴别发酵型G—杆菌）

麦康凯平板~中等强度选择性、是非发酵菌鉴定的一个依据

SS琼脂~（用于志贺菌和沙门菌的分离）选择过强要带一个弱选择平板互补

碱性琼脂或TCBS~粪便中分离霍乱弧菌以及其他弧菌

营养肉汤~用于标本及各类细菌增菌

痰标本~选用血平板、中国蓝/麦康凯、巧克力平板分离

G—杆菌~用中国蓝/麦康凯筛选

肺炎链球菌、白喉棒状杆菌~用血平板分离

含杆菌肽的巧克力平板~用于筛选嗜血杆菌

克氏双糖铁琼脂属于鉴别培养基~用于鉴别肠道致病菌和肠道非致病菌。

细菌的培养和分离技术

细菌实验室：紫外线灯置于台面上1M处、工作开始前照射20分钟

操作台每天擦洗、地面每周至少一次

无菌实验室：使用前消毒30分钟

细菌的接种与分离：平板划线分离法

斜面接种法（单个菌落纯培养）

液体接种法（液体生化管的接种以及增菌培养）

穿刺接种法(半固体培养基、明胶、双糖管接种多用于菌种保存、细菌动力观察和某些特性观察）

倾注平板法（测定牛乳、饮水、尿液标本的细菌数）

涂布接种法（纸片法药敏测定）

细菌培养方法：

需氧培养法~适用需氧和兼性厌氧、35℃经18~24小时（鼠疫耶尔最适宜28~30℃、李斯特4℃生长）

二氧化碳培养法~5—10%CO2才能生长良好（流感嗜血杆菌、脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌、牛布鲁菌）化学法：碳酸氢钠0.4g和浓盐酸0.35ml

厌氧培养法~适用兼性厌氧菌和专性厌氧菌培养

细菌的生长现象

表面特征：光滑型菌落（S型菌落）、粗糙型菌落（R型菌落）、黏液型菌落（M型）

血琼脂溶血：a溶血（草绿色部分溶血不完全透明溶血环）

β溶血（清晰透明溶血环）

γ溶血（无溶血环）

气味：铜绿假单胞（生姜味）、变形杆菌（巧克力烧焦味）、放线菌（泥土味）

白假丝酵母菌（酵母味）、厌氧梭菌（腐败的恶臭味）

生长现象：大多数呈现均匀浑浊、少数链状细菌（炭疽芽孢杆菌、链球菌）沉淀生长结核分枝、枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞等专型需氧菌呈表面生长形成菌膜

半固体培养基易于观察细菌的动力

细菌L型的检查

油煎蛋样（典型L型）、丝状菌落（F型）、颗粒型菌落（G型）

若不能及时送检应加入20%蔗糖无菌溶液或高渗肉汤增菌培养基

细菌的生物化学试验

碳水化合物的代谢

糖类发酵试验（若能分解糖类产酸）鉴定细菌最主要、最基本试验（尤其对肠杆菌科）

氧化-发酵试验（O/F试验）~有分子氧参加为氧化型，进行无氧降解为发酵型。（发酵型细菌在有氧中也能分解葡萄糖），不分解葡萄糖的细菌为产碱型（主要用于肠杆菌科与非发酵菌鉴别，也可葡萄球菌与微球菌鉴别）

β半乳糖苷酶试验（ONPG）~生成黄色的邻硝基酚（主要用于迟缓发酵乳糖菌株快速鉴定）不发酵乳糖的细菌为阴性

七叶苷水解试验~七叶苷与二价铁反应使培养基变黑（D群链球菌与其他链球菌鉴别、前者为阳性。也用于G—杆菌与厌氧菌鉴别）

甲基红试验~PH降至4.5以下遇甲基红呈红色（鉴别大肠埃希菌与产气肠杆菌，前者阳性。肠杆菌科中沙门菌属、志贺菌属、枸橼酸杆菌属、变形杆菌属等为阳性，肠杆菌属与哈福尼亚菌属为阴性）

V-P试验~碳水化合物代谢试验。常与甲基红试验一起使用（前者阳性的细菌，后者通常阴性）

蛋白质与氨基酸的代谢

明胶液化试验~培养基液化为阳性（肠杆菌科的鉴别：普通变形、奇异变形、阴沟杆菌、沙雷菌均可液化明胶，厌氧菌如产气荚膜、脆弱类杆菌也能液化明胶）

吲哚（靛基质）试验~分解色氨酸生成红色吲哚为阳性（肠杆菌科鉴定：大肠埃希菌、变形杆菌阳性，志贺菌、沙门菌阴性）

硫化氢试验~分解含硫氨基酸产生黑褐色硫化氢为阳性（肠杆菌科中属及种的鉴别：绝大多数为阳性、少数沙门菌属有阴性）

尿素分解试验~产生大量氨使酚红指示剂遇碱变红为阳性（主要用于肠杆菌中变形杆菌属鉴定）

苯丙氨酸脱氨酶试验~（阳性的细菌有：变形杆菌属、普罗威登、摩根菌属细菌）

氨基酸脱羧酶试验~生成氨和二氧化碳，使培养基变碱性，溴甲酚紫变紫为阳性（主要用于肠杆菌科鉴别：沙门菌属除了伤寒与鸡沙门外，其余沙门菌属均为阳性；之后就出了宋内和鲍氏志贺菌为阳性，其余均为阴性）

碳源和氮源利用试验

枸橼酸盐利用试验~某些细菌以铵盐为唯一氮源、利用枸橼酸盐为唯一碳源，培养基由淡绿变为深蓝为阳性（肠杆菌科中菌属间的鉴定：沙门、克雷伯为阳性其余全阴）

丙二酸盐利用试验~同上（肠杆菌科中属间及种的鉴别：克雷伯菌属为阳性）

各种酶类试验

氧化酶试验~试剂为1%盐酸四甲基对苯二胺或1%盐酸二甲基对苯二胺（肠杆菌科阴性、假单胞菌阳性鉴别）

过氧化氢酶（触酶）试验~（G+球菌初步分群：葡萄球菌和微球菌阳性、链球菌阴性）

硝酸盐还原试验~甲液（对氨基苯磺酸+醋酸）与乙液（a-萘胺+醋酸）等量混合，出现红色为阳性（肠杆菌科细菌菌为阳性，铜绿假单胞菌等假单胞菌可产生氮气）

酯酶试验~蓝色为阳性（用于厌氧菌鉴别：中间类杆菌阳性其余类杆菌属阴性；芽孢梭菌属中产芽孢、肉毒瘤阳性其余阴性）

卵磷脂酶试验~乳白色混浊环为阳性（厌氧菌鉴别：产气荚膜梭菌、诺维梭菌阳性其余梭菌阴性）

NDA酶试验~出现透明环为阳性（肠杆菌中沙雷菌与变形杆菌阳性其余阴性；G+球菌中只有金葡菌阳性其余阴性）

凝固酶试验~致病性葡萄球菌可产生血浆凝固酶（鉴定葡萄球菌致病性重要指标：金葡菌、中间葡萄球菌为阳性）

CAMP试验~划线交界处出现箭头样溶血区为阳性（链球菌中只有B群链球菌CAMP阳性，其余阴性）可做为特异性鉴定

胆汁溶菌试验~胆汁或胆盐可溶解肺炎链球菌，菌落消失为阳性（肺炎链球菌与甲型链球菌鉴别，前者阳性）

抑菌试验

O/抑菌试验：对弧菌属有抑制作用，出现抑菌环为敏感（弧菌科属间鉴别：弧菌属、邻单胞对O/敏感，气单胞菌属耐药）

杆菌肽试验：A群链球菌几乎全部对杆菌肽敏感，其他群链球菌耐药(用于A群与非A群鉴别)

奥普托欣试验：几乎所有肺炎链球菌对Optochin敏感，对其他链球菌无作用。抑菌环直径＞14mm为敏感，《14mm在做胆汁溶菌试验以正式是否为肺炎链球菌（用于肺炎链球菌与其他链球菌鉴别）

典型大肠埃希菌生化反应结果：乳糖+、IMViC(++——)

血清学试验

血清学鉴定：用已知特异性抗体的免疫血清与未知纯种细菌或标本中的抗原反应

抗体效价升高4倍或4倍以上才有诊断意义、在患者血清中检出病原微生物抗原有诊断意义

动物试验

无菌动物~均无微生物存在、且无任何抗体

悉生动物~注入已知5~17正常肠道菌丛

清洁动物~最低限度疾病动物

无特殊病原体动物~即屏障系统动物

实验动物选择：选最敏感的动物作为对象

小白鼠对肺炎链球菌、破伤风外毒素最敏感

豚鼠对结核分枝杆菌、白喉棒状杆菌敏感

幼猫对金黄色葡萄球菌肠毒素最敏感

一般选用成年动物、年龄按体重估算、雌雄各半

菌种保存与管理

斜面和半固体培养基，加上液体石蜡保存菌种是常用又简易的保存方法

血液琼脂斜面保存~链球菌、肺炎链球菌

巧克力斜面~脑膜炎奈瑟菌

鸡蛋斜面保存法~Vi抗原的沙门菌属

目前最常用：冷冻干燥保存法~又名冷冻真空干燥法

菌种保管：在细菌能够生长不易变异的前提下选择~营养丰富、一般不同含糖培养基和液体培养基

一般细菌4℃保存、单真菌、霍乱弧菌、铜绿假单胞、须室温保存

淋病奈瑟菌、脑膜炎奈瑟菌、初次分离的流感嗜血杆菌须保存于37℃

微生物的商品化、自动化检验

生化反应系统由10~24项指标组合而成，得到3~7位的数据

API系统：鉴定肠道菌的API-20E、鉴定厌氧菌的API-20A等

说明：资料整理自网络，可能知识点存在遗漏或不正确，请以教材为准

医学谷考试系统包含最全检验职称（初、中、高级）、输血职称（初中级、高级）和微生物职称（初中级，高级），是你备战的不二选择！

检验职称考试

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